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凱氏定氮儀測定氮含量分哪三個步驟
發布時間:2022-06-06   點擊次數:192次
凱氏定氮儀是根據蛋白質中氮的含量恒定的原理,通過測定樣品中氮的含量從而計算蛋白質含量的儀器。因其蛋白質含量測量計算的方法叫做凱氏定氮法,故被稱為凱氏定氮儀,又名定氮儀、蛋白質測定儀、粗蛋白測定儀。廣泛用于食品、農作物、種子、土壤、肥料等樣品的含氮量或蛋白質含量分析。

凱氏定氮測定有三個步驟,即消化、蒸餾、滴定。

消化:將含氮的有機化合物(蛋白質)與濃硫酸和催化劑(硫酸銅或凱氏消化片)一同加熱,使蛋白質分解,其中碳和氫被氧化成二氧化碳和水逸出,而樣品中的有機氮轉化為氨(NH3)并與硫酸結合形成硫酸銨。(銨 NH4+)

消化過程:微火加熱煮沸,燒瓶內物質炭化變黑,產生大量泡沫,泡沫消失后加大火力保持微沸狀態,至液體成藍綠色澄清狀態后繼續加熱 05-1h,結束后冷卻。(可使用自動消解儀完成前處理工作)


蒸餾:得到的溶液經稀釋定容后加入NaOH,蒸餾釋放出NH3,冷凝之后收集于硼酸溶液中。

蒸餾過程:先將消化好的樣品進行稀釋,加入NaOH,經過加熱后產生的氨氣進入冷凝管,經過冷凝之后流入裝有硼酸溶液的接收瓶中。形成硼酸銨。(硼酸溶液中加有混合指示劑,形成硼酸銨之后吸收液由酸性變為堿性,顏色由紫紅轉變為藍綠色。)


滴定:用已知濃度的鹽酸標準溶液進行滴定,根據鹽酸消耗的量來計算出氮的含量,然后乘以相應的換算因子,即得到蛋白質的含量。(滴定是指一種定量分析的手段,也是一種化學實驗操作。它通過兩種溶液的定量反應來確定某種溶質的含量,是根據指示劑的顏色變化指示滴定終點,然后目測標準溶液消耗體積,計算分析結果。)

滴定過程:用鹽酸標準溶液滴入硼酸銨溶液中,使溶液的顏色由藍綠色變為淺紅色。

 

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